工作流程分类: 病理染色方法
使用日期: 打印日期201712
SOP：HE标准染色程序 撰写人: 施婷 批准人:
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目的：规范实验流程操作，避免工作中的失误，提高染色效率与染色质量。 适用范围：10%中性甲醛固定的组织样本。 1.试剂准备：
1.1试剂：1）二甲苯；2）乙醇（80%、95%、100%）；3）苏木素（珠海贝索购置）；4）分化液（1%盐酸乙醇）；5）返蓝液（碳酸锂缓冲液）伊红（0.5%）；6）中性树胶
1.2工具：染架；染缸；计时器 2.染色步骤：
2.1将烘30分钟含有载玻片的染色架转移至第一缸二甲苯染色缸，上下涮洗3次后浸润5分钟。
2.2染色架从染色缸中小心取出，离液面上方2厘米处轻轻摆动，待无液体滴落时再。转移至第二缸二甲苯中浸润5分钟。
2.3小心取出染色架，轻轻沥干后至第三缸二甲苯中浸润5分钟。 2.4在无水乙醇中上下涮洗3次后浸润2分钟。 2.5上下涮洗3次放入95%乙醇中浸润2分钟。 2.6上下涮洗3次放入80%乙醇中浸润2分钟。
2.7将染色架轻轻放入流水中冲洗至切片无雾状，水流应轻柔以免组织掉片。 2.8在苏木素染液中上下涮洗3次后浸润5分钟。 2.9流水洗2分钟，待水中无苏木染液后进行下步。
3.0将染色架轻轻沥干水后，放在1%盐酸乙醇中上下3次后放置4秒。 3.1小心放入流水中冲洗1分钟后，放入碳酸锂返蓝液中30秒。 3.2放入流水中5min进行流水冲洗。 3.3放入伊红溶液反复提拉浸润3次（3s）。 3.4放入无水乙醇中浸润2min。
3.5放入第二缸无水乙醇中浸润2min，将染色架小心取出放入通风橱桌面上。 3.6自然风干4-5分钟后，在组织周围滴一滴中性树胶封片即可。
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工作流程分类: 病理染色方法
使用日期: 打印日期201712
SOP：HE标准染色程序 撰写人: 施婷 批准人:
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4.注意：
4.1实验人员戴手套操作。
4.2苏木素染色可视新旧、组织，稍微改变染色时间。
4.3如果细胞核染色模糊不清，染色过深，可视情况延长分化液处理时间。 4.4如果染色杂质过多，在返蓝过程可以反复在水中提拉几下（3~20次不等）。 4.5染色过程中要注意观察组织是否有脱落情况，及时分析原因。 4.6干性封片：染色完成后等载玻片自然风干，再封片。
4.7如要进行湿性封片时，可在最后一步酒精结束后直接进入二甲苯中10s，直接封片。
4.8使用结束注意玻璃缸盖子是否盖好，防止液体挥发；缸盖和玻璃缸编号要一一对应。
4.9苏木素在使用一段时间后,在表面回产生金属膜。当出现这种现象时,可用粗滤纸捞去,否则贴于切片上将较难除去。
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