货号: MS2810 规格：100管/96样
组织总磷含量测定试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
磷的存在形态包括无机磷与有机磷。无机磷主要指磷酸根，参与生物体内多种代谢，包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等。通过测定总磷与无机磷含量即可了解作物对磷的利用率，进而为合理施肥提供依据。
测定原理：
总磷经消化后，转化成无机磷。钼蓝法是测定无机磷含量的经典方法，一定条件下，钼蓝与磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物质，通过测定 660nm 光吸收，即可计算无机磷含量，进而可计算出组织中总磷含量。
自备实验用品及仪器：
离心机、水浴锅、可调式移液、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水和浓硫酸。
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试剂组成和配置：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存（强腐蚀性，强氧化性）。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前配制，加入 7.5mL 蒸馏水，溶解后再加入 5mL
试剂二，混匀。
标准品：液体×1 支，20μmol/L 无机磷标准液，－20℃保存。
有机磷消化：
取带盖试管，加入精确称取的约 0.1g 组织，加浓硫酸 1 mL，盖紧（防止水分散失）后沸水浴 10min 左右，待溶液呈黑色或棕色时取出。稍冷后，加试剂一 200μL，充分混匀，盖紧后继续沸水浴，直到溶液呈透明状，取出室温冷却后，加蒸馏水 8.8 mL，充分混匀；室温，
8000g，离心 10min，取上清液待测。
测定方法：
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。
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2.打开水浴锅，调节温度到 40℃。
3.空白管：取 0.5mL EP 管，依次加入 100μL 蒸馏水，100μL 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A 空白管。
4.标准管：取 0.5mL EP 管，依次加入 10μL 标准液，90μL 蒸馏水，100μL 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A 标准管。
5.测定管：取 0.5mL EP 管，依次加入 10μL 上清液，90μL 蒸馏水，100μL 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A 测定管。
组织总磷含量计算：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
按照蛋白含量计算
总磷含量(mmol/mg prot) = [C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总÷Cpr
= 1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W
按照样本质量计算
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总磷含量(mmol/g )= [C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总÷W
=1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W
C 标准液：1 mmol/L；V 总：上清液总体积，10 mL=0.01 L；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；
W：样品质量，g。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下：
（1）按照蛋白含量计算
总磷含量(mmol/mg prot) = [C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总÷Cpr
= 1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W
（2）按照样本质量计算
总磷含量(mmol/g )= [C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总÷W
= 1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W
C 标准液：1 mmol/L；V 总：上清液总体积，10 mL=0.01 L；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；
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W：样品质量，g。
注意事项：
1. 试剂三需临用前配制，并且当天使用完毕。
2. 40min内完成比色。
3. 最低检出限为10μmol/L。
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