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微生物的培养基

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 微生物的培养基

培养基:是人工配制的,适合微生物生长繁殖或长生代谢的营养基质。培养基在配成之后,都应该马上灭菌,否则就会有杂菌生长,改变培养基的固有成分和性质,不合适再来培养微生物。

培养基中必须具备微生物生长所必须的六大类营养元素,以及合适的ph,渗透压及氧化还原电势等条件。 用途:促进微生物的生长,积累代谢产物,分离微生物菌种,鉴定生物种类,微生物细胞计数。

一. 明确目的:针对不同的培养基对象及目的,选取或设计

不同营养特点的培养基,不同培养基的微生物对所需要的营养要求也不同。

二. 营养协调:微生物能否维持最适生长,不仅与微生物所

需的六大营养要素的合理供给有关,还要与培养基中各种营养物质的浓度及配比有关,这就是营养协调。 C 无氧变酸 } c/N=糖/Pr=酸/NH4+

N 有氧变铵 } (改变培养基的PH值) 碳源不足,菌体容易早衰;碳源过量,菌体生长过旺,代谢产物积累不足,氮源不足,菌体生长缓慢,故要获

得大量的菌体,c/N宜低些,要获得含碳量的优谢产物,c/N宜高些,要获得含氮量大的优谢产物,c/N宜低些。 水>碳源>氮源>p, S>K, Mg>生长因子 三. 条件适宜

PH

每种微生物生长都有自己的最适PH范围。

细菌 PH 7.0---8.0 放线菌 7.5----8.5 酵母菌 3.8----6.0 霉菌 4.0---5.8

1. 外援调节:按实际需要添加碱液或酸(强酸,强碱) 2. 内源调节:(1).缓冲剂 (2).不溶性的碳酸盐(CaCO3) (3).调节培养基的碳氮比。 氧化及氧化还原电位

1. 好氧型微生物<通入无菌风,搅拌> 2. 厌氧型微生物<除氧气,添加还原态化合物,降低氧化还原电位,减少氧气对其生长繁殖影响)。

渗透压:由于膜半透性及两侧水分子浓度差异形成的水压。

当环境渗透压远低于细胞原生质的渗透压时,就会出现细胞的膨胀,轻者影响细胞的正常代谢,重者出现细胞破裂。

当环境渗透压远高于原生质的渗透压时,会导致细胞皱缩,细胞膜与细胞壁分开,即所谓的质壁分离现象。 只有等渗透压条件最适宜微生物生长。0.9%是生理盐水(NaCL0无菌水速度要快,否则菌细胞吸胀破裂,最好用生理盐水,作梯度稀释。 1. 根据营养成分分类

天然培养基:指利用一些天然的动植物组织器官和抽提物,如牛肉膏,蛋白胨,麸皮,马铃薯,玉米浆等制成的培养基。优点:取材广泛,营养全面而丰富,制备方便,价格低廉,适用于以获得菌体为目的大规模微生物培养基。缺点:成分复杂,每批成分不稳定,因而营养成分难以控制,实验结果的重复性差,实验室中仅能用于一些较粗放的实验。

合成培养基:利用化学成分及数量完全了解的物质配制而成的培养基。优点:成分精确,实验结果的重复性强。缺点:配制较复杂,药品的价格较贵,且微生物在此类培养基上生长缓慢,不宜用于大规模生产。

半合成培养基:用一部分天然物质作为碳源,氮源及生长辅助物质。又适当补充少量无机盐类,应用广泛,能使绝大多微生物良好地生长。

半合成培养基 :1.PDA Potato Dextrose Agar (Medium), 马铃薯 葡萄糖 培养基

2.PDB Potato Dextrose Broth 马铃薯 葡萄糖 培养基

根据配制完成后培养基的物理状态分类:

固体培养基:指呈固体状态的培养基,最常用的是直接在液体培养基中加凝固剂制成。

凝固剂不会被培养的微生物分解利用,对所培养的微生物也无毒害作用,凝固剂温度不能太低,要在微生物生长的范围内保持固体状态,且要耐一定的高温,灭菌过程中不会被破坏,透明度要好,黏着力要强。(琼脂,明胶,硅胶等)。

琼脂:融化96℃ 凝固40℃ 1.5%----2.0% 微生物分离,鉴定,计数和菌种保存等. 有些培养基是直接用天然固体物质制成,

半固体培养基:指在液体培养基中加少量凝固剂,呈现半固体状态的培养基.(琼脂 0.2%---0.7%) (穿刺法,菌体的运动)

液体培养基:指把各种营养物质配制成水溶液,调节适宜的PH,不加任何凝固剂,形成液体状态的培养基。

通过震荡或搅拌增加培养基的通气量,有利于微生物的生长和积累优谢产物。

噬菌体:感染微生物的病毒。

温和性噬菌体:有些噬菌体侵染细菌后不产生子代噬菌体或引起细菌裂解。

溶源菌:核染色体上整合有前噬菌体并能正常生长繁殖的细菌。

敏感指示菌-----噬菌斑:噬菌体裂解细菌或被感染细菌的生长形成的透明或浑浊的空斑。

摇床的作用:首先使菌体与培养基充分接触,满足菌体生长需要,增加溶氧量,利于好氧菌的生长,如果静置培养,菌体可能会出现在底部,减缓生长速度,如果是真菌的活静置培养得到的菌体,能明显看到菌丝的形态与平板生生长状态类似,而摇床培养得到的菌体是球型的,即菌丝聚集成团。 根据培养基的功能:

基础培养基:具有最简单的物质组成的培养基,所含有的培养基物质是一般微生物生长繁殖所必须的基本营养物质<牛肉膏,蛋白胨,培养>

加富培养基:在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的一类营养丰富的培养基。根据培养菌种的生理特性加入有利于该种微生物生长繁殖所需要的营养物质。<血,血清,动物或植物组织液或其他生长因子>,用以培养某种或某类营养要求苛刻的异养微生物。

选择培养基:用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基,目标微生物能够快速生长,而非目标微生物的生长被抑制。

鉴别培养基:为鉴别不同类型的微生物在培养基中加入某种营养物质或化学物质<指示剂或抑制剂>,从而将目标微生物的菌落与同一平板上其他微生物的菌落区别开来。 高压蒸气灭菌锅 1.一般培养基:121摄氏度 15----30min 2.含糖培养基 112摄氏度 15---30min

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