仪器与用具
1、仪器:各类天平、磁力搅拌器、冰箱;
2、用具:烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、标签;
3、试剂:95%酒精,0.1-1N NaOH,0.1-1NHCl,配制MS培养基所需的各种无机物、有机物,蒸馏水。 方法步骤
(一)母液的配制
母液是欲配制培养基的浓缩液,一般配成比所需浓度高10—100倍的溶液。 优点:(1)保证各物质成分的准确性。
(2)便于配置时快速移取。 (3)便于低温保藏。
1、MS大量元素母液(10X)
称10升量溶解在1升蒸馏水中。配1升培养基取母液100ml。
① ② ③ ④ ⑤
化学药品 NH4NO3 KNO3
CaCl2·2H2O MgSO4·7H2O KH2PO4
1升量 1650 mg/L 1900 mg/L 440 mg/L 370 mg/L 170 mg/L
10升量 16.5g 19.0g 4.4g 3.7g 1.7g
2、MS微量元素母液(100X)
称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。
① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦
化学药品 MnSO4·4H2O ( MnSO4·H2O) ZnSO4·7H2O CoCl2·6H2O CuSO4·5H2O Na2MoO4·2H2O KI H3BO3
1升量
22.3 mg/L (21.4 mg/L) 8.6 mg/L 0.025mg/L 0.025 mg/L 0.25 mg/L 0.83 mg/L 6.2 mg/L
10升量 223mg 86mg 0.25mg 0.25mg 2.5mg 8.3 mg 62 mg
注意:CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量(0.25 mgX10=2.5 mg)或100倍量(25 mg)称取后,定容于100ml水中,每次取10ml或1ml(即含0.25 mg的量)加入到母液中。
3、MS铁盐母液(100X)
称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。
化学药品 Na2·EDTA FeSO4·7H2O
1升量 37.3 mg/L 27.8 mg/L
10升量 373 mg 278 mg
注意配制时,应将两种成分分别溶解在少量蒸馏水中,其中EDTA盐较难完全溶解,可适当加热。混合时,先取一种置容量瓶(烧杯)中,然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡,至产生深黄色溶液,最后定容,保存在棕色试剂瓶中。
4、MS有机物母液(100X)
称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。
① ② ③ ④ ⑤
化学药品
烟酸
盐酸吡哆素(VB6) 盐酸硫胺素(VB1) 肌醇 甘氨酸
1升量 0.5 mg/L 0.5 mg/L
100 mg/L 2 mg/L
10升量 5mg 5mg 1 g 20mg
5、生长调节剂
单独配制,浓度为1-5 mg/ml(书中为0.5-1mg/ml),一般配成4 mg/ml 。 配制培养基母液时注意事项:
①一些离子易发生沉淀,可先用少量蒸馏水溶解,在按配方顺序依次混合; ②配制母液时必须用蒸馏水或重蒸馏水; ③药品应用化学纯或分析纯;
④溶解生长素时,可用少量0.5 –1N的NaOH 或95%酒精溶解,溶解素类用0.5 –1N的HCl加热溶解。 (二)母液的保存
1、装瓶:将配制好的母液分别装入试剂瓶中,贴好标签,注明各培养基母液的名称、浓缩倍数、日期。注意将易分解、氧化的溶液,放入棕色瓶中保存。 2、贮藏:4℃冰箱。
MS培养基配方
铁盐 有机成分 微量元素 大量元素 成分 钾 KNO3 铵 NH4NO3 磷酸二氢钾 KH2PO4 硫酸镁 MgSO4.7H2O 氯化钙 CaCl2.2H2O 碘化钾 KI 硼酸 H3BO3 硫酸锰 MnSO4.4H2O 硫酸锌 ZnSO4.7 H2O 钼酸钠 Na2MoO4.2 H2O 硫酸铜 CuSO4.5 H2O 氯化钴 CoCl2.62 乙二胺四乙酸二钠 Na2.EDTA 硫酸亚铁 FeSO24.7H2O 肌醇 甘氨酸 分子量 101.11 80.04 136.09 246.47 147.02 166.01 61.83 223.01 287.54 241.95 249.68 237.93 372.25 278.03 使用浓度(mg/L) 1900 1650 170 370 440 0.83 6.2 22.3 8.6 0.25 0.025 0.025 37.3 27.8 100 2
盐酸硫胺素 VB1 盐酸吡哆醇 VB6 烟酸 VB5或VPP 蔗糖 sucrose 琼脂 agar 342.31 0.1 0.5 0.5 30g/L 7 g/L 大量元素 成分 钾 KNO3 铵 NH4NO3 磷酸二氢钾 KH2PO4 硫酸镁 MgSO4.7H2O 氯化钙 CaCl2.2H2O 微量元素 碘化钾 KI 硼酸 H3BO3 硫酸锰 MnSO4.4H2O 硫酸锌 ZnSO4.7 H2O 钼酸钠 Na2MoO4.2 H2O 分子量 使用浓度 (mg/101.21 80.04 136.09 246.47 147.02 166.01 61.83 223.01 287.54 241.95 1900 1650 170 370 440 0.83 6.2 22.3 8.6 0.25 硫酸铜 CuSO4.5 H2O 氯化钴 CoCl2.62 铁盐 乙二胺四乙酸二钠 Na2.EDTA 硫酸亚铁 FeSO24.7H2O 有机成分 肌醇 甘氨酸 盐酸硫胺素 VB1 盐酸吡哆醇 VB6 烟酸 VB5 或 VPP 编辑本段注意事项:
249.68 237.93 372.25 0.025 0.025 37.3 278.03 27.8 蔗糖 sucrose 琼脂 agar 100 2 0.1 0.5 0.5 342.31 30g /L 7 g /L 1.母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L。 2.母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5.5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。
3.MS培养基中还需要加入2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、6 苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(0 1 mg/mL)。其配制方法是:分别称取这3种物质各10 mg,将2,4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶,将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解,溶解过程需要水浴加热,最后分别定容至100 mL,即得质量浓度为0 1 mg/mL的母液。
4.组织培养是否能够获得成功,主要取决于对培养基的选择。不同的培养基具有不同的特点,也就适合于不同的植物种类和接种材料。在开展组织培养项目时,首先要对各种培养基进行了解和分析,以便能从中选择合适的使用。组培用的培养基一般包括基础培养基和激素,但是植物激素的种类和数量,随着不同培养阶段和不同材料有变化,因此各培养基配方中均不列入植物激素。常用的基础培养基除了有MS培养基,还有B5培养基,N6培养基。