超滤分离纯化麦胚蛋白酶解物的研究

维普资讯 http://www.cqvip.com 第２２卷第２期　湖南科技大学学报（自然科学版）　２００７年　６月　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｕｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）　Ｖｏｌ＿２２　Ｎｏ．２　Ｊｕｎ．　２００７　超滤分离纯化麦胚蛋白酶解物的研究　程云辉　，文新华ｚ，王璋　（１．长沙理工大学生物与食品工程学院。湖南长沙４１００７６；２．湖南商学院。湖南长沙４１０２０５；３．江南大学食品学院，江苏无锡２１４ｏ３６）　摘要：采用超滤法从麦胚蛋白酶解物中初步分离纯化抗氧化活性肽，考察了操作压力、操作温度及料液浓度等工艺参数对　超滤过程中膜通量的影响，并对超滤前后麦胚蛋白酶解物的相对分子质量分布、氨基酸组成及抗氧化活性进行了比较．结果表明：　采用截留相对分子质量３　ｏｏｏ的聚砜膜对麦胚蛋白酶解物进行超滤分离的最适工艺条件为操作压力０．３０　ＭＰａ、操作温度２０℃、麦　胚蛋白酶解物浓度３５　ｇ／Ｌ；超滤有效地除去了料液中相对分子质量较大的组分，麦胚蛋白酶解物中相对分子质量１　０００～５００及　５００～１３０的组分分别为２３．８１％、４８．６３％，其抗氧化活性得到提高，清除０２－・的Ｉｃ　由超滤前的１．６４　ｍｇ・ｍＬ　降至超滤后的１．２９　ｍｇ－ｍＬ～．图５，表３，参１３．　关键词：麦胚蛋白酶解物；超滤；分离；纯化；抗氧化活性　中图分类号：ＴＳ２０１．２　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７２—９１０２（２００７）０２—０１０２—０４　蛋白质分子大小、组成及结构等方面的多样性、复　杂性不可避免地导致了蛋白质酶解液的成分复杂多　样，因此，选择经济合理的方法分离纯化蛋白酶解液就　成为水解肽得以广泛应用的关键．通常生物活性肽的分　子量都较小，一些学者利用超滤对蛋白酶解物中的活　进行了比较．　１　材料与方法　１．１　材料　性肽进行分离，发现超滤滤过液部分比截留液部分具　麦胚蛋白酶解物ＷＧＰＨｓ：按文献［５刷备；　鲁米诺（Ｌｕｍｉｎｏ１）：Ｆｌｕｋａ公司；　超滤膜：截留分子量３　０００　Ｄａ，上海亚东核级树脂　有限公司；　１＿２主要仪器　有更高的生物活性【　．超滤技术在蛋白质及生物活性物　质的浓缩与分离方面具有重要意义，适应于大分子物　质（蛋白质、多糖、胶体等）与小分子组分及溶剂的分离　翻，不仅具有分离过程短、不发生相变及成本低等优点，　且易于实现工业化大生产ｌ４】．　目前报道的生物活性肽主要是小分子肽，相对分　子质量大多在３　０００以下，本试验拟采用截留相对分子　质量３　０００的聚砜膜对麦胚蛋白酶解物（ｗｈｅａｔ　ｇｅｒｍ　ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ，ＷＧＰＨｓ）进行初步分离纯化．采用　超滤技术分离纯化蛋白酶解液的关键问题是膜污染引　起的膜通量下降，因此本研究考察了操作压力、操作温　超滤装置：上海亚东核级树脂有限公司；　旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂；　ＬＧＪ一１Ｏ冷冻干燥机：北京四环科学仪器厂；　氨基酸自动分析仪：美捷伦ｌ１００；　ＳＨＧ—Ｃ型生物化学发光仪：上海检测技术所检测　仪器厂；　Ｗａｔｅｒｓ　６００高效液相色谱：美国Ｗａｔｅｒｓ公司．　度及料液浓度等工艺参数对超滤过程中膜通量的影　响，以确定最适的超滤工艺参数；并对超滤前后　ＷＧＰＨｓ的相对分子质量分布、氨基酸组成及生物活性　坚銎是皙　；基金项目：“十一五”国家高技术研究发展计划（　画　高技术研究发展计划（　计划）　计划）（（项目编号　Ａ项目编号　Ａ　１９Ｚ３　；；长沙理工大学基金项目（长沙理工大学基金项目（博士起动基金）博士起动基金）　８６３　２００６ＡＡＩＯＺ３２７）＇０作者简介：程云辉（　一），女，湖南望城人．博士，副教授，主要从事食品生物技木．？１９６４　．的研究．　１Ｏ２　维普资讯 http://www.cqvip.com １．３试验方法　１．３．１膜通量的测定　超滤系统运行稳定后，控制压力、料液流速、温度　等操作参数，取样，记录一定时间内的透过液，重复３　次求平均值，按下式计算膜通量［４１．　％）＝　×１００．　式中，　为膜通量，ｌ＿ｌｍ　．ｈ；　为取样体积，Ｌ；　为取样时　间，ｈ；Ａ为有效膜面积．　１．３．２超滤工艺参数对膜通量的影响　改变操作压力及温度、料液浓度等工艺参数，考　察上述工艺参数对膜通量的影响．　１．３．３超滤分离纯化ＷＧＰＨｓ　在一定的操作压力、操作温度、料液浓度下，选用　截留相对分子质量为３　０００的聚砜膜（Ｐｓ膜）进行超　滤，收集滤过液，经真空浓缩、冷冻干燥得超滤预分离　的ＷＧＰＨｓ．　１．３．４蛋白质或多肽含量的测定　固体样品采用凯氏定氮法，参照ＧＢ５４９７－８５；液　体样品采用福林酚法嘲．　１．３．５氨基酸组成的测定　ＷＧＰＨｓ在１ｌ０ｏＣ、６　ｍｏｌ／ＬＨＣＩ中水解１８　ｈ，然后在美　捷伦１　１００型氨基酸自动分析仪Ｅ进行氨基酸测定．　１．３．６　ＷＧＰＨｓ体外抗氧化活性测定　超氧阴离子自由基（０５－・）清除能力的测定　：　用微量１　ｍｍｏｌ／Ｌ盐酸将邻苯三酚溶解；再用０．１　ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ配成１　ｍｍｏｌ／Ｌ水溶液；鲁米诺用微量０．１　ｍｏｌ／Ｌ碳酸钠溶液溶解后配成１　ｍｍｏｌ／Ｌ水溶液，测试　前用新配制的０．０５　ｍｍｏｌ／Ｌ、ｐｉｌｌ０．２并含Ｏ．１　ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ的碳酸盐缓冲液稀释成０．１　ｍｍｏｌ／Ｌ．　测定方法参考文献【】】并略作改进：向测量管中加入　１００　Ｌ待测ＷＧＰＨｓ样品，加入邻苯三酚溶液１００　Ｌ，再加８００　Ｌ　ｐＨ１０．２鲁米诺碳酸缓冲液混合液（反　应总体积为１　ｍＬ），放人反应池中，启动发光，立即用－Ｒ　程序连续测定６／ｓ的发光积分强度，以第６个６　ｓ的发光　积分强度ＣＰ自为标准进行计算，并以同浓度的还原型谷　胱甘肽溶液做对照，所有测定值均为３次平均值．　生物化学发光仪测定条件：高压３：５５，甄别电压：　０．２Ｖ，温度２５　ｃ【＝．　抑制率（％）＝（空白ｃ　一样品ｃ　）／　空白ＣＰ＆Ｘ　１００．　采用Ｅｘｃｅｌ的多项式回归得到样品浓度与抑制率　的回归方程，根据回归方程求ＩＣ∞（５０％抑制浓度）．　２结果与讨论　２．１　操作压力对膜通量的影响　超滤是以压力为驱动的膜分离过程，压力差是分　离性能的重要参数．本试验在操作温度２５　ｃ【＝、料液浓　度５％的条件下考察了滤膜两侧压力差Ａ　Ｐ对膜通量　Ｊ影响．从图１可知，随着滤膜两侧压力差Ａ　Ｐ的增　大，初期膜通量迅速提高，Ｊ与ＡＰ成直线关系，而后　膜通量不再随△Ｐ线性递增，而是缓慢增加，表现为　膜通量对压差增加的敏感性降低，形成曲线段，当ＡＰ　超过０．３０　ＭＰａ时，膜通量趋于稳定，不再随操作压力　的增大而提高，在图中表现为曲线最终近乎水平线．　这是因为操作压力的增大导致浓差极化加剧及膜表　面蛋白质吸附层被进一步压密，当压力达到某一临界　值时，膜面凝胶层逐渐形成并增厚，膜通量不再增大．　文献［８］也有相似的研究结论．因此，本研究选择０．３Ｏ　ＭＰａ作为超滤分离ＷＧＰＨｓ的最适操作压力．　一３　２．５　２　１．５　１　器０—５０　　压力差／ＭＰａ　图１操作压力对膜通量的影ｇｖｆｒ２５℃，料液浓度５　Ｆｉｇ．１　Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｐｒｅｓｓｕｒｅ　ａｎｄ　ｌｆｕｘ　２．２操作温度对膜通量的影响　通常膜通量会随着温度的升高而增大．这是因为　料液黏度下降，料液中各种分子的活化能提高，扩散　系数和传质系数增大，由膜界面向液相主体的反向扩　散通量增加，浓差极化减弱所致［４１．操作温度的选择受　制于膜的耐受温度和料液稳定性两因素．虽然本试验　采用的聚砜膜能耐受０　１００　ｏＣ的温度，但是较高的　温度可能会影响ＷＧＰＨｓ的生物活性，因此本试验在　操作压力０．３０　ＭＰａ、料液浓度５％的条件下考察了４　种不同操作温度时膜通量的变化，不同操作温度对膜　通量的影响见图２．从图２可知，操作温度越高，膜通　量越大．从尽可能保持蛋白酶解物的生物活性、防止　微生物生长所致的膜污染及节省能源来考虑，选择　２０℃作为操作温度比较合适．　２．３料液浓度对膜通量的影响　料液浓度也是影响超滤速度的一个重要因素，本　试验在操作压力０．３０　ＭＰａ、操作温度２０℃的条件下　１０３　维普资讯 http://www.cqvip.com 考察了６种不同料液浓度对膜通量的影响，从图３可　的比例及疏水性Ｑ值见表２及表３，从表２可知，超滤　后ＷＧＰＨｓ中除Ｐｒｏ含量明显降低外，其它疏水性氨　基酸Ｔｙｒ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、ｌｉｅ及Ｌｅｕ的含量都略有提高，从表　３可知，超滤后ＷＧＰＨｓ中疏水性氨基酸的摩尔百分比　知，随着料液浓度的升高，开始阶段膜通量下降较快，　随后膜通量的下降就趋于缓慢，超滤过程中，料液浓　度升高导致膜通量减少的原因之一是蛋白质浓度的　增加导致料液粘度的显著增加，蛋白质分子在溶液中　的扩散系数随之减小，浓差极化现象加重　；同时料液　从３１．６４％提高至３２．６４％，疏水性Ｑ值也略有增大，　ＷＧＰＨｓ的小分子组分中含有较高比例的Ｔｙｒ、Ｖａｌ、　Ｐｈｅ、ｌｉｅ及Ｌｅｕ，这些疏水性氨基酸可能与ＷＧＰＨｓ的　某些生物活性有相关性．　浓度升高加强了蛋白质分子之间的相互作用，削弱了　蛋白质分子与膜之间的相互作用力【砌，因而透过阻力　增加，膜通量下降，因此，本研究认为ＷＧＰＨｓ浓度为　３５　ｇ／Ｌ时可以获得较好的分离效果．　４　｛ｓ　２　。　Ｍｉｎｕｔｅｓ　暇　０　１Ｏ　２Ｏ　３Ｏ　４Ｏ　５Ｏ　图５超滤后ＷＧＰＨｓ的相对分子质量分布　Ｆｉｇ．５　Ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆＷＧＰＨｓ　ａｆｔｅｒ　ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ　温度，℃　表１　超滤前后ＷＧＰＨｓ相对分子质量分布的比较　Ｔａｂ．１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｄｏｎ　Ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｄｉｓｔｆｉｂｕｄｏｎ　ｏｆＷＧＰＨｓ　图２操作温度对膜通量的影ｇ－￣（ＡＰ　０．３０　ＭＰａ，料液浓度５　Ｆｉｇ．２　Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｌｕｘ　ｆ料液浓度　ｇ・Ｌ－　）　表２超滤前后ＷＧＰＨｓ氨基酸组成的比较（ｇ・１００　ｇ　蛋白质）　Ｔａｂ．２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆＷＧＰＨｓ　图３料液浓度对膜通量的影响（△Ｐ　０．３０ＭＰａ，Ｔ２０℃）　Ｆｉｇ．３　Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆｓａｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｆｌｕｘ　氨基酸名称超滤前组成超滤后组成　氨基酸名称超滤前组成超滤后组成　Ａｓｐ　ＧＩｕ　７．９４　１５．５４　８．７０　１４．６８　Ｃｙｓ—ｓ　Ｖａｌ　０－２９　６－３Ｏ　０－２５　６．９４　２．４超滤对ＷＧＰＨｓ相对分子质量分布的影响　超滤前后ＷＧＰＨｓ相对分子质量分布见图４、图５　Ｓｅｔ　Ｈｉｓ　Ｇｌｙ　ＴＩｌｒ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｔｖｒ　４．６３　２．９４　６．３９　３．８６　９．７２　５．９２　３．１３　４．７２　３．Ｏ８　５．３２　４．２１　８．７０　６．５９　３．６２　Ｍｅｔ　Ｐｈｅ　Ｉｈ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　Ｔｒｐ　２．１５　４．５８　４．１５　７．４７　７．３２　５．９５　１．７０　２．２９　５．３６　及表１，从表１可知，超滤前后ＷＧＰＨｓ中相对分子质　量大于３　０００的组分由１６．７０％减少至１．３５％，超滤后　的ＷＧＰＨｓ中相对分子质量１　０００～５００的组分含量为　４．４９　８．４９　６．８１　４．０３　１．７２　２３．８　１％，５００　１３０的组分高达４８．６３％，说明超滤非常　有效地除去了料液中相对分子质量较大的组分．　Ｏ．２Ｏ　Ｏ．１５　０．１０　表３超滤前后ＷＧＰＨｓ的疏水性及生物活性的比较　Ｔａｂ．３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆＷＧＰＨｓ　６　暮　注：字母不同表示差异显著，Ｐ＜０．０５　５．ｏ０　ｌＯ．ｏ０　ｌ５．ｏ０　２Ｏ．ｏ０　２５．ｏ０　３Ｏ．ｏ０　Ｍｉｎｕｔｅｓ　Ｏ．ｏ５　Ｏ．ｏ０　２．６超滤对ＷＧＰＨｓ生物活性的影响　图４超滤前ＷＧＰＨｓ的相对分子质量分布　Ｆｉｇ．４　Ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆＷＧＰＨｓ　ｂｅｆｏｒｅ　ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ　Ｊａｎｇｔ１］和Ａｎｎｅ［：ｌ等通过超滤富积水解物中的ＡＣＥ　抑制肽研究结果说明超滤可以有效地对蛋白酶解物　进行分离纯化，本研究对超滤前后ＷＧＰＨｓ的体外抗　氧化活性进行了研究，结果见表３，从表３可知，超滤　２．５超滤对ＷＧＰＨｓ氨基酸组成的影响　超滤前后ＷＧＰＨｓ的氨基酸组成、疏水性氨基酸　１０４　维普资讯 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后ＷＧＰＨｓ的体外抗氧化活性皆有显著提高，其清除　超氧阴离子自由基（Ｏ　一・）的Ｉｃ卯由１．６４０　ｍｇ・ｍＬ－－降　Ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ　Ｅ￣ｙｍｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　Ｐ￣ｆｉｄｅ　ｆｒｏｍ　Ｂｅｅｆ　Ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ【Ｊ】．Ｍｅａｔ　Ｓｃｉｅａｃｅ，２００５，６９：６５３—６６１．　【２】　ＡＮＮＥ　Ｐ　Ｌ，Ｋ０ＳＫＩＮＥＮ　Ｐ。ＰＩＩＬＯＬＡ　Ｋ，ｅｔ　．Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ　ｌ　Ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ　Ｅｎｚｙｍｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　Ｐｒｏｐｅｒｉｅｓ　ｔｆ　ｏＷｈｅｙ　Ｐｒｏｉｔｅｉｎ　Ｄｉｇｉｓｔｓ　Ｃｏｎｃｅｎ—Ｔｒｔｉａｏｎ　至１．２９０　ｍｇ・ｍＬ－。，超滤后体外抗氧化活性提高的原因　之一可能是ＷＧＰＨｓ的小分子组分含有较高比例的　Ｔｙｒ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ等疏水性氨基酸，而这些疏水性　氨基酸可能与小分子肽的抗氧化性有关，Ｈｕａ—Ｍｉｎｇ　ａｎｄ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｃｔｉｖｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ【Ｊ】．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｄａｉｒｙ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，　２ｏ（）０．６７：５３—６４．　［３】ＬＥＷＩＳ　Ｍ　Ｊ．Ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｉｉｏｎ　ｉｎ　Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ　ｉｎ　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ：Ｐｒｍｄ＃嚣ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ【Ｍ】．　Ｇｒａｎｄｉｓｏｎ　Ａ　Ｓ　ｅｄ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ：Ｗｏｅｄｈｅａｄ　Ｐｕｂ　Ｌｉｄ。１９９６．　Ｃｈｅｎ　ｃ“等选用来自芽孢杆菌的蛋白酶水解大豆Ｂ一球　［４　刘茉娥．４】膜分离技术【Ｍ】．北京：化学工业出版社，１９９８．　ＵＵ　Ｍｏ—ｅ．Ｍｅｍｂｒａｎｅ　Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　Ｐｒｅｓｓ，１９９８．　蛋白，分离出６个由５一ｌ６个氨基酸残基组成的抗氧　化肽，它们的Ｎ一。末端皆为疏水性氨基酸Ｖａｌ或Ｌｅｕ；　原因之二可能归因于超滤后抗氧化活性肽在ＷＧＰＨｓ　中的浓度相对提高．　【５】程云辉，王璋，许时婴．酶解麦胚蛋白制备抗氧化肽的研究Ⅲ．食　品科学，２００６，２７（６）：１４７—１５１．　ＣＨＥＮＧ　Ｙｕｎ—ｈｕｉ，ＷＡＮＧ　Ｚｈａｎｇ，ＸＵ　Ｓｈｉ－ｙｉｎｇ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　ｆｒｏｍ　Ｗｈｅａｔ　Ｇｅｒｍ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｂｙ　Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　Ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　叨．ＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ。２００６，２７（６）：１４７—１５ｌ　３结论　１．通过考察工艺参数对超滤过程中膜通量的影　响，确定采用截留相对分子质量为３　０００的聚砜膜对　ＷＧＰＨｓ进行超滤分离的最适工艺条件是：操作压力　０．３０　ＭＰａ，操作温度２Ｏ℃，ＷＧＰＨｓ浓度３５　ｇ／Ｌ；　２．超滤有效地除去了料液中相对分子质量较大的　组分，ＷＧＰＨｓ中相对分子质量１　０００—５００及５００　【６】Ｌｏｗｒｙ０Ｈ，Ｒｏ￣ｅｂｒｏｕｌ　Ｎ　Ｊ，ＦａｒｒＡ，ｅｔ　ａ１．ＰｒｏｔｅｉｎＭｅｓａｕｒｅｍｅｎｔｗｉｔｈ　ｔｈｅ　Ｆｏｉｌｎ　Ｐｈｅｎｏｌ　Ｒｅａｇｅｎｔ［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，１９５１。１９３：２６５—２７５．　【７】Ｙｕ　Ｗ，Ｚｈａｏ　Ｙ，Ｘｕｅ　Ｚ，Ｊｉｎ　Ｈ，Ｗａｎｇ　Ｄ．Ｔｈｅ　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｌｙｃｏｐｅｎｅ　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ　Ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｏｍ　Ｔｏｍｒａｔｏ　Ｐａｓｔｅ［Ｊ】．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｏｉｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｓ　Ｓｏｃｉｅｔｙ，２００ｌ，７８（７）：６９７—７０１．　【８】张佳程。王海燕，楮庆环．发酵乳中ＡＣＥ抑制剂的超滤分离【Ｊ】＿中国　乳品工业，２００４，３２（１）：３２—３４．　ＺＨＡＮＧ　Ｊｉａ－ｃｈｅｎｇ，ＷＡＮＧ　Ｈａｌ—ｙａｎ，ＣＨＵ　Ｑｉｎｇ－ｈｕａｎ．Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＣＥ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｂｙ　ＵＦ　ｆｒｏｍ　Ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ　ＭｉｌｋⅢ．Ｃｈｉｎａ　Ｄａｌｌｙ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，　２００４。３２（１）：３２～３４．　ｆ９１　ＲＡ０　Ａ，ＳＨＡＬＬＯ　Ｈ　Ｅ，ＥＲＩＣＳＯＮ　Ａ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆＳｏｙ　１３０的组分分别为２３．８１％、４８．６３％，ｗＧＰＨｓ清除超氧　阴离子自由基（Ｏ２－・）的ＩＣ５０由超滤前的１．４　６ｍｇ・ｍＬ－－　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ　Ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　Ｍｅｍｂｒａｎｅ　Ｕｌｔｒａ—ｒｒｌｔ＝ｔｉｏｎ［］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ＪｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ。２００２，６７（４）：ｌ　４ｌ２一ｌ　４ｌ８．　ｆｌ　０１　ＳＨＡＬＬ０　Ｈ　Ｅ，ＲＡ０　Ａ，ＥＲＩＣＳ０Ｎ　Ａ　Ｐ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｏｙ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ　ｂｙ　Ｕｈｒａｆｉｈｒａｔｉｎ　ａ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＦｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００１，６６　降至超滤后的１．２９　ｍｇ・ｍＬ一，　参考文献　【１】　ＪＡＮＧ　Ａ，ＬＥＥ　Ｍ．Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡｎｇｉｏｔｅＬａｓｉｎ　（２）：２４２—２４６．　［１１】ＣＨＥＮ　Ｈｕａ－ｍｉｎｇ，ＭＵＲＡＭＯＴＯ　Ｋ，ＹＡＭＡＵＣＨＩ　Ｆ，ｅｔ　．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｓｏｙｂｅａｎ　Ｂ－ｅｏｎｇｌｙｃｉｎ叨．　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｏｄ　ｈｅｍｉＣｓｔｒｙ，１９９５，４３：５７４—５７８．　Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｕｒｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｗｈｅａｔ　Ｇｅｒｍ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ　ｂｙ　Ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ　ＣＨＥＮＧ　Ｙｕｎ—ｈｕｉ１，ＷＥＮ　Ｘｉｎ—ｈｕａ２，ＷＡＮＧ　Ｚｈａｎｇ３　（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆＢｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｆｏｏｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃｈａｎｇｓｈａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆＳｃｉｅｎｃｅ　ｎｄａ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ，４１００７６，Ｃｈｉｎａ；２．Ｔｈｅ　Ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ　ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆＢｒａｎｄ　Ｓｔｒａｇｅｇｙ，Ｈｕｎａｎ　Ｂｕｓｉｎｅｓｓ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｃｈａｎｇｓｈａ，４１０２０５，Ｃｈｉｎａ；３．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆＦｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ｎｄ　Ｔｅａｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　Ｙａｎｇｔｚｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，　Ｗｕｘｉ，２１４０３６，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｉｃａｔｉｆｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｆｒｏｍ　ｗｈｅａｔ　ｇｅｒｍ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ　ｗａｓ　ｉｌｌｕｍｉｎａｔｅｄ　ｂｙ　ｕｈｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｕｌｔｒａ＿ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｄｉｓｔｉｂｕｔｉｏｎ，ｒ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｗｈｅａｔ　ｇｅｒｍ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ，Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗ　ｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｃｏｎｄｉｔｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｕｌｔｒａ＿ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ　ａｒｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｗｈｅａｔ　ｇｅｒｍ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ　３５ｇ／Ｌ，ｐｒｅｓｓｕｒｅ　ｏｆ　０．３０ＭＰａ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　２Ｏ℃，ｗｈｅａｔ　ｇｅｒｍ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ　ａｆｔｅｒ　ｕｌｒｔａｆｉｌｒｔａｔｉｏｎ　ａｒｅ　ｐｒｉｍａｒｉｌｙ　ｃｏｍｐｏｓｅｄ　ｏｆ　４　ｒａｃｔｆｉｏｎｓ：　１　８．４９％ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌｒ　ｗｅｉａｇｈｔ　ｒｎｇｅ　ｏｖｅｒａ　１０００。２３．８　１％ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌｒ　ｗｅｉａｇｈｔ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　１０００－５Ｏ０，４８．６３％ｉｎ　ｔｈｅ　５００－１３０　ａｎｄ　１　１．０７％ｕｎｄｅｒ　１　３０，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｗｈｅａｔ　ｇｅｒｍ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｗａｓ　ｅｎｈａｎｃｅｄ　ａｆｔｅｒ　ｕｌｒｔａｆｉｌｒａｔｔｉｏｎ．ｗｉｔｈ　ＩＣ５０ｆｒｏｍ　１．４　６ｍｇ’ｍＬ—ｔｏ　１．２９　ｍｇ’ｍＬ一．５ｆｉｇｓ．，３ｔａｂｓ．，１　１ｒｅｆｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｗｈｅａｔ　ｇｅｒｍ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ；ｕｈｒａｆｉｈｒａｔｉｏｎ；ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ；ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　Ｂｉｏｇｒａｐｈｙ：Ｃｈｅｎｇ　Ｙｕｎ—ｈｕｉ，ｆｅｍａｌｅ，ｂｏｒｎ　ｉｎ　１　９６４，ｄｏｃｔｏｒ，ａｓｓｏｃｉａｔｅ　ｐｒｏｆｅｓｓｏｒ，ｆｏｏｄ　ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．　１０５