应用_双质控法_加强_即刻法_室内质控

󰀁论󰀂󰀂著󰀁

应用 双质控法!、加强 即刻法!室内质控

段惠玲,李忠俊,滕本秀

(第三军医大学新桥医院输血科,重庆400037)

󰀂󰀂摘󰀂要:目的󰀂应用 双质控法!,加强、完善 即刻法!室内质控,并用于抗󰀁HIV抗体检测的质量监控。方法󰀂采用ELISA法进行HIV抗体检测。每次更换试剂时,使用原试剂和新批号试剂同板检测3次,并采用同一质控血清。原试剂的质控结果参与原数据组按 即刻法!分析,新试剂的质控结果参与原试剂数据组按 即刻法!分析,3次均不向负值偏移至告警或失控时,从第3次开始新数据组用 即刻法!分析。更换质控血清时,两种质控血清同板检测3次,即在同一试剂板中分别加入原质控血清和新质控血清;原质控血清的检测结果参与原数据组按 即刻法!分析,新质控血清的检测结果从第3次开始新数据组用 即刻法!分析。结果󰀂采用 双质控法!较好地解决了 即刻法!开始几次检测结果无法控制的状况。结论󰀂 双质控法!进一步加强、完善了 即刻法!在ELISA检测中的质量监控作用。

关键词:抗󰀁HIV抗体;ELISA;室内质控

中图分类号:R446.61

文献标识码:A

文章编号:1671󰀁8348(2006)11󰀁0971󰀁03

Strengtheninglabqualitycontrolwithinstantmethodbydoublequalitycontrol

DUANHui󰀁ling,LIZhong󰀁jun,TENGBen󰀁xiu

(DepartmentofBloodTransfusion,XinqiaoHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400037,China)Abstract:Objective󰀂Toapproachthewayofstrengtheninglabqualitycontrolwithinstantmethodbydoublequalitycontrolandtoapplyitintheanti󰀁HIVantibodytest.Methods󰀂Anti󰀁HIVantibodywasexaminedbyELISAmethod.Thesameplatewastestedthreetimeswithoriginalagentandnewagent,usingthesamequalitycontrolserum,whilemakingchangeofagentbatchnumber.Thequalitycontrolresultoforiginalagentwasputintotheoriginaldatagroupandthenanalyzedwithinstantmethod.Thesameplatewastestedthreetimeswithoriginalqualitycontrolserumandnewqualitycontrolserumwhilemakingchangeofqualitycontrolserum.Theresultoftestwithoriginalqualitycontrolserumwasputintotheoriginaldatagroupandanalyzedwithinstantmethod.Theresultoftestwithnewqualitycontrolserumwasanalyzedwiththeinstantmethodfromthethirdnewdatagroup.Results󰀂Thedoublequalitycontrolmethodsolvedtheproblemofuncontrolledtestresultintheinitialtimeswiththeinstantmethod.Conclusion󰀂ThedoublequalitycontrolmethodfurtherstrengthensthequalitycontrolwiththeinstantmethodinELISAtest.

Keywords:anti󰀁HIVantibody;ELISA;qualitycontrol󰀂󰀂ELISA检测是一个步骤多、影响因素多、人为干预因素多的实验方法,不规范的操作过程可能造成漏检。目前,本室采用 即刻法!对ELISA检测结果进行质量监控。作者发现 即刻法!连续检测3次即可对第3次及以后的检测进行质控,弥补了质控图连续检测20次才能进行质控的不便[1],但前2次的检测结果却无法监控。而采用 双质控法!对前3次检测结果进行质控,再按 即刻法!处理,可较好的解决这一问题,现以HIV抗体ELISA检测为例介绍如下。1󰀂材料与方法

1.1󰀂试剂󰀂抗󰀁HIV检测试剂A(国产金豪公司,20050329,20050420),试剂B(国产科华公司,批号20030724,20031030)。所有试剂均有国家卫生部批准文号,均在有效期内使用。1.2󰀂质控血清󰀂用经HIV抗体检测确证中心确定为抗󰀁HIV抗体阳性的血清,经56∀40min灭活后,再用已知抗󰀁HIV阴性人的血清稀释至金豪试剂盒临界值(Cut󰀁Off,CO值)0.120的2~3倍,再将其分装成小份(0.5ml),注明配制时间、名称后,置-20∀以下冰箱内保存,保存期为1年。使用前取出一小份融化后待用[1]。

1.3󰀂设备仪器󰀂酶标仪S/N5782型,洗板机CAT5955(美国基因公司),孵育箱HH.B11󰀁420型(上海跃进医疗器械厂)。1.4󰀂方法󰀂(1)采用ELISA法,操作严格按照试剂盒内说明书进行。每次检测均加设外部对照1孔(自制的质控血清)。 即刻法!按照参考文献[2]操作。(2) 双质控法!:当更换质控血清时,将新质控血清在原质控血清用完前与原质控血清一起测定3次以上,即在同一酶标板上各加新旧质控血清1~2孔(即 双质控法!)[3]。原质控血清的OD(opticdensity,OD值)值参与原数据组继续用 即刻法!分析,新质控血清的OD值进行新一组数据按 即刻法!分析。当更换试剂批号时,在原试剂结束前将新批号试剂2排(18孔)与原试剂同板检测3次,两种批号的试剂均加入同一质控血清和部分相同样本;原试剂质控的OD值参与原数据组继续用 即刻法!分析。新批号的质控OD值进行新一组数据按 即刻法!分析,并同时参与旧批号质控数据组用 即刻法!分析。从第3次检测及以后开始运用新批号试剂对标本进行检测,质控OD值也只在新一组数据中按 即刻法!分析。但是,如新批号试剂的质控OD值在旧批号质控数据组按 即刻法!分析中,均向负值偏移至告警或失控,而同板原试剂的质控结果属在控状态时,此新批号试剂则不能使用。

2󰀂结󰀂󰀂果

2.1󰀂两种批号试剂抗󰀁HIV检测󰀂 双质控法!室内质控结果见表1,原试剂第10、11、12次与新批号试剂第1、2、3次对应同板试验。原试剂(批号20050329)最后3次(10、11、12次)质控的S/CO值(S为质控OD值),分别为6.517、7.491、7.316。新批号试剂(批号20050420)前3次质控的S/CO值分别为

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5.450、5.942、5.900。原试剂的最后3次与新批号试剂前3次

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试验的质控结果均处于在控状态。

表1󰀂󰀂两种批号试剂抗󰀁HIV检测 双质控法!室内质控结果

原批次数101112101112

1234567

5.4505.9425.9004.2756.4414.2985.342

5.75.3925.6025.3845.378

0.2730.7770.8200.9060.828

0.6530.7081.0231.1661.284

1.1511.4371.6171.2241.333

在控在控在控在控在控

S/CO6.5177.4917.316

新批次数

123

123

5.4505.9425.900

S/CO

x7.821

s1.4307.7917.7527.9157.7357.582

SI上限1.1941.3601.3041.8491.8521.843

SI下限1.9211.2771.3621.4141.5081.598

结果在控1.9972.0531.5361.4371.360

备注原数据组在控在控在控在控在控新数据组

表2󰀂󰀂新旧两种质控血清抗󰀁HIV检测 双质控法!室内质控结果

原质控次数678678

S/CO7.2077.1247.918

新质控次数

1231234567

15.47413.84213.41415.62516.50517.85517.33314.05015.401

14.24314.514.97215.45315.72115.51215.500

1.0871.1251.2971.6531.6681.6531.547

1.1320.9211.1821.4541.2791.4171.522

0.7631.0441.2011.2331.3831.2691.348

在控在控在控在控在控在控在控

S/CO

x6.9326.9607.079

s0.8570.7860.803

SI上限1.7201.8421.654

SI下限1.0231.1511.276

结果在控在控在控

新数据组备注原数据组

2.2󰀂两种质控血清抗󰀁HIV检测󰀂 双质控法!室内质控结果见表2,原质控血清与新质控血清对应同板试验。原质控血清最后3次(第6、7、8次)质控的S/CO值分别为7.207、7.124、7.918,新质控血清前3次质控的S/CO值分别为15.474、13.842、13.414,原质控血清最后3次检测结果均处于在控状态。

3󰀂讨󰀂󰀂论

目前,大部分HIV初筛实验室均采用 即刻法!与常规质控图相结合的方法对抗󰀁HIV抗体ELISA检测的质量进行室内监控。要保证所有检测结果的可靠性,就必须保证每次检测均处于在控状态。在实验室更换试剂或质控血清时采用 双质控法!较好地解决了开始时的前几次结果无法控制的状态。从表1、2中可以看出,原试剂和原质控血清均处于在控状态,这说明所更换的试剂和质控血清的前3次试验结果也处于在控状态。从表1中可以看出,新批号试剂质控孔的S/CO值与原

试剂的相比虽然有一些波动,但参与原试剂质控数据组按 即刻法!分析时仍处于在控状态。分析表1、2结果,更换新批号试剂或质控血清后,从第3次结果开始的 即刻法!质控结果均在控,从而保证了更换新批号试剂或质控血清的所有结果均处于在控状态,进一步说明ELISA检测的所有结果处于连续可靠状态。

每次检测的最终目标是要获得一个可靠的结果,这就需建立一个全面的质量监控管理体系。 即刻法!因简便实用,易于掌握,特别适合一般HIV抗体检测初筛实验室[2,4],但在应用过程中我们发现它存在不足之处。从试验过程可以看出,运用 双质控法!可以使试验结果始终处于有效的可控状态,从而弥补了 即刻法!室内质控的不足。当然,由于ELISA试剂的有效期较短,在实际操作中应尽量采用效期较长的试剂。在HIV抗体检测质量管理中,室内质控直接影响到试验结果的可靠性[5],不同批号试剂甚至同一(下转第974页)

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2.3󰀂效果分析󰀂116例患者共输注机采血小板584例次,总的有效输注4例次,占83.7%,临床出血症状改善549例次,占94.1%,见表1。

表1󰀂󰀂血液病患者输注机采血小板疗效比较

病种APBSCTAll󰀁PBSCTAAALLANLLMDSITPMLTTP合计

n28371023622161116

输注例次10817584911228183236584

有效例次107175248108251052254

无效例次有效率(%)

106143781195

99.1100.0.797.6.1.357.495.683.383.7

重庆医学2006年6月第35卷第11期

统计血小板输注无效中约80.0%~90.0%为HLA抗体引起,10.0%~20.0%由血小板特异性抗原的抗体所引起,HLA抗体的产生与输入的血细胞数量相关。当输注的白细胞数量<5#106/L时,可有效地预防或减少输注无效的发生[4]。资料统计,随着输注次数的增加,输注无效发生率亦增加,因此可以提高输注机采血小板数量来减少同种免疫的发生率。为了尽量减少血小板输注无效的发生,目前已有多种方法;如用去除白细胞过滤法去除血小板悬液中的污染白细胞,减少同种免疫;本文71例次机采血小板均用白细胞滤器去除白细胞后输注;输注前进行血小板交叉配合可减少血小板输注无效的发生[5]。󰀁󰀁射线辐照灭活免疫活性的淋巴细胞亦可减少血小板输注无效的发生。本文输注有效患者4例次,有效率83.7%,疗效明显,与󰀁󰀁射线照射(25Gy)有关联性,经25Gy󰀁󰀁射线照射的机采血小板已无活性免疫细胞,不刺激免疫抗体的产生,可较长期保持CCI有效值[6]。

各类型血液病之间机采血小板的输注有效率,其差异比较具有统计学意义,但临床疗效尚不能确定,可能存在个体差异与治疗方案有关,有待进一步研究。参考文献:

[1]杨春森.低温-80∀保存浓缩血小板及临床应用[J].深

圳医学,1998,11(4):4[2]滕本秀,段惠玲.机采新鲜血小板与冰冻血小板的临床应

用疗效分析[J].激光杂志,2005,26(5):96[3]BLajchmanMA.Movelplateletproolucts,substitutesand

allenmativesTransfus[J].ClinBiol,2001,8(3):261[4]

陈纯,黄绍良.HLA󰀁I类配型血小板输注在造血干细胞移植和血液病中的应用[J].中国输血杂志,2002,15(2):109

SchlossbebHR,HermanJH.Plateletdosing[J].Transfus

3󰀂讨󰀂󰀂论

血液病患者普遍存在血小板减少,机采血小板的输注是血液病治疗阶段提升血小板数量,减少出血的有效措施。而机采血小板输注是否有效,通常认为与患者的体表面积、体重等影响血容量的指标有关[3]。但我院临床观察比较CCI值与体重之间的关系,结果发现二者无直接关联性。本文观察表明机采血小板输注效果好,4例次患者输注后血小板计数明显上升,有效率83.7%,549例次患者输注后临床出血症状明显改善,占94.1%,临床输注总有率为83.7%。与以往手工分离血小板输注比较疗效相差显著,且不良反应少。

影响血小板输注疗效的因素很多,一般可分为免疫性和非免疫性两大类,感染、发热、脾肿大均属于非免疫性因素[4]。本文结果表明,感染能使血小板输注疗效显著降低,本文中血液病患者合并明显感染有9例,输注机采血小板有效率为58.2%。但影响血小板输注疗效的重要因素为免疫性破坏,据

[5]

ApheresisSci,2003,28(3):221

[6]李忠俊,陈幸华.造血干细胞移植期间辐照成分血输注的

疗效观察[J].重庆医学,2003,32(10):1314

(上接第972页)

批号试剂不同板次所检测的样本或质控品的OD值都会有一定的差异;不同批次质控血清的试验结果也不一样。在更换试剂或质控血清时试验结果处于不稳定状态,每次试验都应对结果进行有效的质控分析。ELISA试验的影响因素较多,各种影响因素均导致结果的不准确,这样每次实验的室内质控就显得尤其重要,只有摸索出适合自己实验室的质量管理方法,才能确保试验结果的准确性和可靠性。参考文献:[1]

徐庆华,殷仰周,董丽丹.抗󰀁HCV试剂的 即刻法!室内

质控[J].中国输血杂志,2001,14(2):85

[2]段慧玲,滕本秀.HIV抗体检测 即刻法!室内质控存在的有关问题探讨[J].免疫学杂志,2003,19(3):257

[3]卫生部临床检验中心编.临床实验室质量管理文件汇编[G].北京:卫生部,1999,38

[4]孙玉芬,郭永翠,闫建英.抗󰀁HIV定值血清即刻性室内质控[J].中国输血杂志,1998,11(4):201

[5]毕小云,幸贵邦,黄维嘉,等.质量管理中的差错分析在

临床化学检验中的作用[J].重庆医学,2003,32(12):1639